目前，如果想知道河流、湖泊、水庫等地表水是否富營養(yǎng)化，可以通過檢測水中磷、氮等營養(yǎng)物質(zhì)的含量，或者通過觀察水中藻類的繁殖情況來判斷。 .但是我們今天要講的是通過檢測水中的葉綠素a來判斷水體是否富營養(yǎng)化。我們都知道，水體富營養(yǎng)化最重要的表現(xiàn)就是藻類在水中的大量繁殖，而所有的藻類都含有葉綠素a。因此，可以通過水體中葉綠素a的含量來判斷水中藻類的數(shù)量。

該方法的原理是用濾膜過濾一定量的樣品以截留藻類，研磨破碎藻類細(xì)胞，用丙酮溶液提取葉綠素，在750nm、664nm、647nm和630nm波長測量提取物的吸光度離心后。該公式計(jì)算了水中葉綠素 a 的濃度。收集河流中的葉綠素 a 水樣
測試所需的試劑和儀器
實(shí)驗(yàn)試劑
1 丙酮。
2 碳酸鎂。
3 丙酮溶液：9+1。
將 100ml 實(shí)驗(yàn)用水加入到 900ml 丙酮中。
4 碳酸鎂懸浮液。
稱取1.0g碳酸鎂，加入100ml實(shí)驗(yàn)水，攪拌成混懸液（使用前搖勻）。
5 玻璃纖維膜：直徑47mm，孔徑0.45um-0.7um。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備
1 個采樣瓶：1L 或 500ml 棕色玻璃瓶，帶接地塞。
2過濾裝置：配備真空泵和玻璃砂過濾裝置。
3 研磨裝置：玻璃研缽或其他組織研磨機(jī)。
4 離心機(jī)：相對離心力可達(dá)1000×g（轉(zhuǎn)速3000r/min～4000r/min）。
5 玻璃刻度離心管：15ml，螺帽材料不與丙酮反應(yīng)。
6 可見分光光度計(jì)：帶 10mm 石英比色皿。
7 注射器過濾器：0.45um PTFE 有機(jī)相注射器過濾器。
8 通用實(shí)驗(yàn)室儀器和設(shè)備。
水樣采集和保存
水樣一般使用有機(jī)玻璃集水器或其他合適的采樣器采集對于水面以下0.5m的水樣，可根據(jù)需要在湖泊、水庫中進(jìn)行分層采樣或混合采樣，采樣量為1L或500ml。如果水樣中含有沉積固體（如沉積物等），
水樣應(yīng)充分搖勻，然后倒入 2L 量筒中。讓它在黑暗中靜置 30 分鐘，在水面以下 5cm 處取一個水樣并轉(zhuǎn)移到取樣瓶中。向每升水樣中加入 1 ml 碳酸鎂懸浮液，以防止酸化導(dǎo)致顏料溶解。
水樣采集后應(yīng)在0°C-4°C避光儲存和運(yùn)輸，24小時內(nèi)運(yùn)至檢測實(shí)驗(yàn)室過濾（如水樣24小時內(nèi)不能送至檢測實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)現(xiàn)場過濾，濾膜避光（冷藏運(yùn)輸），水樣濾膜-20℃避光保存，14天內(nèi)完成分析。
準(zhǔn)備水樣
在過濾器單元上安裝玻璃纖維過濾器。根據(jù)水體的營養(yǎng)狀況確定采樣量。有關(guān)詳細(xì)信息，請參閱過濾水樣的體積。用量筒量取一定體積的混合水樣，過濾，最后用少量蒸餾水沖洗濾壁。過濾時，負(fù)壓不應(yīng)超過50kPa。當(dāng)水樣剛剛完全通過濾膜時，抽濾結(jié)束。用鑷子取出濾膜，有水樣的一面對折，濾膜用濾紙擦干。
葉綠素 a 是指過濾樣品的體積
研磨
將樣品過濾器放入研磨器中，加入3ml-4ml丙酮溶液，研磨成糊狀。加入3ml-4ml丙酮溶液，繼續(xù)研磨，重復(fù)1-2次，保證5min以上充分研磨。將完全破碎的細(xì)胞提取物轉(zhuǎn)移到玻璃刻度離心管中，用丙酮溶液沖洗研缽和研杵，并一起轉(zhuǎn)移到離心管中，并調(diào)整體積至10ml。
浸入式萃取
將離心管中的研磨提取液充分搖勻混勻后，用鋁箔包裹，4℃避光放置2小時以上，但不超過24小時。浸泡過程中顛倒搖晃2-3次。
離心
將離心管放入離心機(jī)中，以1000×g（3000 r/min～4000 r/min）的相對離心力離心10分鐘。然后用針頭過濾器過濾上清液，得到葉綠素a的丙酮提取物（樣品）供檢測。
檢測步驟
水樣的測定
將樣品移至比色皿中，以丙酮溶液為參比溶液，分別在 750nm、664nm、647nm 和 630nm 波長處測量吸光度。 750nm波長處的吸光度應(yīng)小于0.005，否則需用針頭過濾器再次過濾后再測定。
最終水樣中葉綠素a的質(zhì)量濃度可按相應(yīng)公式計(jì)算。
以上內(nèi)容來自《HJ 897-2017 水質(zhì)中葉綠素a的分光光度法測定》